SERVIZI DI ELETTROFORESI MONODIMENSIONALE
L’elettroforesi su gel di Poliacrilammide (PAGE) è una delle tecniche più utilizzate per separare macromolecole, incluse DNA, RNA e proteine.
L’elettroforesi è in generale il progressi nel quale si applica un campo elettrico per far ‘muovere’ molecole cariche all’interno di una soluzione. In questa tecnica, la mobilità di una molecola carica è direttamente proporzionale alla sua carica netta e alla resistenza della soluzione nella quale si sta muovendo.
Il Sodio Dodecil Solfato (SDS) è un detergente anionico, e le sue molecole possiedono carica netta negativa all’interno dell’intervallo di pH nel quale sono disciolte. Una catena polipeptidica lega una certa quantità di SDS in proporzione alla sua relativa massa molecolare, e la carica negativa dell’ SDS distrugge la maggior parte della struttura complessa delle proteine, specialmente dopo un processo di riduzione con betamercaptoetanolo oppure Ditiotreitolo (DTT). A questo punto le proteine sono completamente srotolate dalla loro struttura complessa a gomitolo di partenza, e riescono a ‘serpeggiare’ in modo che la loro mobilità dipenda esclusivamente dalla loro massa molecolare o peso molecolare. L’estratto proteico, reso così facilmente analizzabile, viene caricato su un gel di poliacrilammide e le proteine migrano secondo il loro peso molecolare apparente, in questo modo vengono separate e possono essere analizzate anche in modo semi quantitativo. l’SDS PAGE è largamente utilizzato nelle analisi proteomiche incluso la determinazione della taglia della proteina, l’identificazione della proteina, l’analisi della purezza della proteina, l’identificazione dei ponti disolfuro e la quantificazione della proteina.
Colorazioni disponibili: Coomassie Colloidale, Colorazione Argentica compatibile con Spettrometria di Massa.
Bioinformatica: Analisi quantitativa delle bande di monodimensionale.
Validazione con anticorpi: Servizi di immunoblotting su membrane di nitrocellulosa (semidryblot) con chemiluminescenza e metodi colorimetrici.
Per pesi molecolari inferiori ai 10 KDa, sono disponibili servizi per l’identificazione di piccole molecole polipetidiche (peptidi/proteine) sul gel di tricina.